考马斯亮蓝法测蛋白质含量，考马斯亮蓝测蛋白

本文目录一览

1，考马斯亮蓝测蛋白
2，考马斯亮蓝G250法测定蛋白质含量
3，考马斯亮蓝法测定蛋白质的公式是什么
4，标准蛋白质样品能否用考马斯亮蓝法测定为什么
5，考马斯亮蓝法测定牛血清蛋白的标准曲线
6，考马斯亮蓝测定固体物质蛋白质含量

1，考马斯亮蓝测蛋白

会的。不仅碱性氨基酸，去垢剂,如SDS，还有高浓度的缓冲液都会有影响。而且由于蛋白质酸性，碱性氨基酸含量不同，即使蛋白质浓度相同，所测出的值也会不同。

考马斯亮蓝测蛋白

2，考马斯亮蓝G250法测定蛋白质含量

测OD值都是需要预先调零的，通常我们测蛋白含量的时候，会用考马斯亮蓝溶液不加蛋白，只加水或者buffer调零，这样的话蛋白质含量是O，OD595 是零。如果你用其他的溶液调零，蛋白质含量是O，OD595 的读数与你调零时用的溶液相关，没有一个一定的值。

1．大量的去污剂如tritonx-100、sds等严重干扰测定。2．蛋白质与考马斯亮蓝g-250结合的反应十分迅速，在2min左右反应达到平衡；其结合物在室温下1h内保持稳定。因此测定时，不可放置太长时间，否则将使测定结果偏低。

考马斯亮蓝G250法测定蛋白质含量

3，考马斯亮蓝法测定蛋白质的公式是什么

公式是根据测量结果自己算出来的：考马斯亮蓝比色法是由Bradford等人建立的1种测定微量蛋白质的方法L5]，考马斯亮蓝所含疏水基团在酸性条件下与蛋白质的疏水微区具有亲和力，通过疏水作用与蛋白质相结合，形成的蓝色蛋白质一染料复合物，在595 nm处有最大吸光度，复合物1 h内保持稳定。在一定的蛋白质浓度范围内，蛋白质一染料复合物在595nm处的吸光度与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质含量的测定。测定时，用同一种标准蛋白（自己选，如牛血清白蛋白，所选的标准蛋白最好是纯化的待测蛋白——但这是理想状态，一般选择氨基酸构成与待测蛋白相近的标准蛋白。否则将影响测定结果）配制成覆盖待测样品蛋白浓度的标准蛋白溶液，然后加等量考马斯亮蓝G-250，混匀后用紫外分光光度计测定个标准蛋白样品的吸光值。并测定待测样品（可稀释成几个不同浓度的样品同时测）的吸光值。所有样品重复测三次。最后以蛋白标准溶液浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。计算出回归方程。如Y=aX+b 让后把待测样品的吸光值代入回归方程，算出待测样品浓度。只要上数据库一搜，这样的论文多的是，要加强自学能力呀！——赚点分真辛苦！

考马斯亮蓝法测定蛋白质的公式是什么

4，标准蛋白质样品能否用考马斯亮蓝法测定为什么

考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质-染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。考马斯亮蓝G-250存在着两种不同的颜色形式，红色和蓝色。考马斯亮蓝G-250在酸性游离状态下呈棕红色，最大光吸收在465nm，当它与蛋白质结合后变为蓝色，最大光吸收在595nm。在一定的蛋白质浓度范围内，蛋白质-染料复合物在波长为595nm处的光吸收与蛋白质含量成正比，通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。

公式是根据测量结果自己算出来的：考马斯亮蓝比色法是由bradford等人建立的1种测定微量蛋白质的方法l5]，考马斯亮蓝所含疏水基团在酸性条件下与蛋白质的疏水微区具有亲和力，通过疏水作用与蛋白质相结合，形成的蓝色蛋白质一染料复合物，在595 nm处有最大吸光度，复合物1 h内保持稳定。在一定的蛋白质浓度范围内，蛋白质一染料复合物在595nm处的吸光度与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质含量的测定。测定时，用同一种标准蛋白（自己选，如牛血清白蛋白，所选的标准蛋白最好是纯化的待测蛋白——但这是理想状态，一般选择氨基酸构成与待测蛋白相近的标准蛋白。否则将影响测定结果）配制成覆盖待测样品蛋白浓度的标准蛋白溶液，然后加等量考马斯亮蓝g-250，混匀后用紫外分光光度计测定个标准蛋白样品的吸光值。并测定待测样品（可稀释成几个不同浓度的样品同时测）的吸光值。所有样品重复测三次。最后以蛋白标准溶液浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。计算出回归方程。如y=ax+b 让后把待测样品的吸光值代入回归方程，算出待测样品浓度。只要上数据库一搜，这样的论文多的是，要加强自学能力呀！——赚点分真辛苦！

5，考马斯亮蓝法测定牛血清蛋白的标准曲线

一、原理考马斯亮蓝G-250（Coomassie G-250）是一种甲基取代的三苯基甲烷，分子中磺酸基的蓝色染料，在465nm处有最大吸收值。考马斯亮蓝G-250能与蛋白质通过范得华相互作用形成蛋白质—考马斯亮蓝复合物蓝色溶液，引起该染料的最大吸收λmax的位置发生红移，在595nm处有最大吸收值。由于蛋白质—考马斯亮蓝复合物在595nm处的光吸收远高于考马斯亮蓝在465nm处的光吸收，因此，可大大地提高蛋白质的测定灵敏度。蛋白质—考马斯亮蓝复合物溶液颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。利用溶液颜色的差异进行比色测定，适合于蛋白质类的定量分析，尤其适合于稀有蛋白质的微量分析。考马斯亮蓝G-250试剂呈色反应颜色稳定、灵敏度高，最低测试蛋白质量在1ug左右。二、操作步骤 1. 标准曲线测定法分别取六只试管，其中一只加入1.0ml蒸馏水做空白，5只分别加入不同体积的浓度为100ug/ml牛血清清蛋白标准液，补充水到1.0ml。然后每只试管加入5.0ml考马斯亮蓝G-250试剂，摇匀放置5min，在紫外-可见分光光度计595nm处测定吸光值。以A595吸光值为纵坐标，牛血清清蛋白的ug数量为横坐标绘制标准曲线。具体操作见下表。蛋白质标准曲线测定加样试剂空白 1 2 3 4 5 100ug/ml牛血清清蛋白/ml 1.0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 牛血清清蛋白/ug 0 10 20 40 60 80 去离子水/ml 0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 考马斯亮蓝G-250试剂/ml 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 吸光值A595 2. 蛋白样品配制浓度约100ug/ml的待测蛋白质溶液。取一只试管加入1.0ml蒸馏水做空白，一支加入0.5ml待测蛋白质溶液，补充水到1.0ml。然后每支试管加入5.0ml考马斯亮蓝G-250试剂，摇匀放置5min后，在紫外-可见分光光度计595nm处测定吸光值。用测得的吸光值从标准曲线上查得相当于牛血清清蛋白的ug数量，计算出待测蛋白质的含量。在标准蛋白质和蛋白质样品的测定时，为了减小误差，每一个浓度的蛋白质做3支平行管。 3.试剂配置 a.牛血清清蛋白标准液结晶牛血清清蛋白或酪蛋白，预先经微量凯氏定氮法标定该蛋白质的百分含量或者根据牛血清清蛋白的消光系数是6.6来计算其百分含量。然后根据该蛋白的纯度配置成浓度为100 ug/ml的蛋白溶液。 b.考马斯亮蓝G-250溶于50ml95%乙醇，加入100ml质量浓度为0.85g/ml的磷酸，作为母液保存，使用时用水稀释到1000ml。试剂的最终浓度为0.01%考马斯亮蓝G-250、质量浓度为0.085g/ml磷酸。

6，考马斯亮蓝测定固体物质蛋白质含量

实验十四考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量　　一、目的　　学习和掌握考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量的原理和方法。　　二、原理　　考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg／mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。　　二、材料、主要仪器和试剂　　1．实验材料　　新鲜绿豆芽　　2．主要仪器　　（1）分析天平、台式天平　　（2）刻度吸管　　（3）具塞试管、试管架　　（4）研钵　　（5）离心机、离心管　　（6）烧杯、量筒　　（7）微量取样器　　（8）分光光度计　　3．试剂　　（1）牛血清白蛋白标准溶液的配制：准确称取100mg牛血清白蛋白，溶于100mL蒸馏水中，即为1 000μg／mL的原液。　　（2）蛋白试剂考马斯亮蓝G-250的配制：称取100mg考马斯亮蓝G-250，溶于50mL 90％乙醇中，加入85％（W／V）的磷酸100mL，最后用蒸馏水定容到1 000mL。此溶液在常温下可放置一个月。　　（3）乙醇　　（4）磷酸（85％）　　四、操作步骤　　1．标准曲线制作　　（1）0~100μg／mL标准曲线的制作：取6支10mL干净的具塞试管，按表1取样。盖塞后，将各试管中溶液纵向倒转混合，放置2min后用1cm光经的比色杯在595nm波长下比色，记录各管测定的光密度OD595nm，并做标准曲线。　　表1 低浓度标准曲线制作　　管号　　1　　2　　3　　4　　5　　6　　1 000μg／mL标准蛋白液（mL）　　0　　0.02　　0.04　　0.06　　0.08　　0.10　　蒸馏水（mL）　　1.00　　0.98　　0.96　　0.94　　0.92　　0.90　　考马斯亮蓝G-250试剂（mL）　　5　　5　　5　　5　　5　　5　　蛋白质含量（μg）　　0　　20　　40　　60　　80　　100　　OD595nm　　（2）0~1 000μg／mL标准曲线的制作：另取6支10mL具塞试管，按表2取样。其余步骤同（1）操作，做出蛋白质浓度为0~1 000μg／mL的标准曲线。　　表2 高浓度标准曲线制作　　管号　　7　　8　　9　　10　　11　　12　　1 000μg／mL标准蛋白液（mL）　　0　　0.2　　0.4　　0.6　　0.8　　1.0　　蒸馏水（mL）　　1.00　　0.8　　0.6　　0.4　　0.2　　0　　考马斯亮蓝G-250试剂（mL）　　5　　5　　5　　5　　5　　5　　蛋白质含量（μg）　　0　　200　　400　　600　　800　　1 000　　OD595nm　　2．样品提取液中蛋白质浓度的测定　　（1）待测样品制备：称取新鲜绿豆芽下胚轴2g放入研钵中，加2mL蒸馏水研磨成匀浆，转移到离心管中，再用6mL蒸馏水分次洗涤研钵，洗涤液收集于同一离心管中，放置0.5~1h以充分提取，然后在4 000r/min离心20min，弃去沉淀，上清液转入10mL容量瓶，并以蒸馏水定容至刻度，即得待测样品提取液。　　（2）测定：另取2支10mL具塞试管，按下表取样。吸取提取液0.1mL（做一重复），放入具塞刻度试管中，加入5mL考马斯亮蓝G-250蛋白试剂，充分混合，放置2min后用1cm光径比色杯在595nm下比色，记录光密度OD595nm，并通过标准曲线查得待测样品提取液中蛋白质的含量X（μg）。以标准曲线1号试管做空白。　　表3 待测液蛋白质浓度测定　　管号　　13　　14　　蛋白质待测样品提取液（mL）　　0.1　　0.9　　5　　0.1　　0.9　　5　　蒸馏水（mL）　　考马斯亮蓝G-250试剂（mL）　　OD595nm　　蛋白质含量（μg）　　五、结果计算　　X×　　提取液总体积（mL）　　样品蛋白质含量（μg / g鲜重）=　　测定时取样体积（mL）　　样品鲜重（g）　　式中：X为在标准曲线上查得的蛋白质含量（μg）。　　六、附注　　1．Bradford法由于染色方法简单迅速，干扰物质少，灵敏度高，现已广泛应用于蛋白质含量的测定。　　2．有些阳离子，如K+、Na+、Mg2+、(NH4)2SO4、乙醇等物质不干扰测定，但大量的去污剂如TritonX-100、SDS等严重干扰测定。　　3．蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合的反应十分迅速，在2min左右反应达到平衡；其结合物在室温下1h内保持稳定。因此测定时，不可放置太长时间，否则将使测定结果偏低。　　七、思考题　　1．制作标准曲线及测定样品时，为什么要将各试管中溶液纵向倒转混合？　　参考答案　　1．将各试管中溶液纵向倒转混合目的是使反应充分，并且使整个反应液均一，否则在比色测定时，结果会有较大偏差，使标准曲线的制作不标准，后续的测定结果就不可靠。

首先所有使用玻璃器皿都要洗干净。1、考马斯亮蓝应在乙醇、磷酸介质中尽量溶解充分。然后过滤定容摇匀。2、用固定的2个比色杯做标准空白比色杯固定，每次测完后用乙醇将测定a值的比色杯洗干净。我测定的r值在0.9925到0.9986供你参考